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高效液相色譜儀操作
1). 過(guò)濾流動(dòng)相,根據(jù)須要選擇區(qū)別的濾膜。
2). 對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3). 打開(kāi)HPLC工作站(包含計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀),連接好流動(dòng)相管道,連接檢測(cè)系統(tǒng)。
4). 進(jìn)入HPLC控制界面主菜單,點(diǎn)擊manual,進(jìn)入手動(dòng)菜單。
5). 有一段時(shí)間沒(méi)用,或者換了新的流動(dòng)相,須要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥,須要在manual菜單下,先點(diǎn)擊purge,再點(diǎn)擊start,沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10 ml/min。
6). 調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動(dòng)相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過(guò)2000。點(diǎn)擊injure,選用合適的流速,點(diǎn)擊on,走基線,觀察基線的情況。
7). 設(shè)計(jì)走樣方案。點(diǎn)擊file,選取select users and methods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方案。若需建立一個(gè)新的方案,點(diǎn)擊new method。選取須要的配件,包含進(jìn)樣閥,泵,檢測(cè)器等,根據(jù)須要而區(qū)別。選完后,點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方案須要包含:a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流,一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;d.走樣時(shí)間,隨區(qū)別的樣品而區(qū)別。
8). 進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方案,點(diǎn)擊start。進(jìn)樣,所有的樣品均需過(guò)濾。方案走完后,點(diǎn)擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后,再用上面的方案走一段基線,洗掉剩余物。
9). 關(guān)機(jī)時(shí),先關(guān)計(jì)算機(jī),再關(guān)液相色譜。
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